1996年，参演反腐刑侦剧《英雄无悔》，该剧是马少骅首次接触影视剧作品。2000年，在历史革命剧《平民大总统》中饰演孙中山。2002年，在近代历史题材电视剧《走向共和》，饰演孙中山。2005年，参演历史剧《汉武大帝。2007年，在革命战争剧《浴血坚持》。2009年，出演革命剧《沂蒙》，并凭借该剧提名第28届中国电视剧飞天奖优秀男演员。

2010年，凭借电视剧《外乡人》提名第25届中国电视金鹰奖最佳男演员。2011年，领衔主演史诗献礼剧《辛亥革命》，第三次饰演孙中山一角。2013年，在抗日谍战剧《一个鬼子都不留》。2014年，参演现代题材电视剧《原乡》。2014年，为纪念邓小平诞辰110周年，在重大革命历史题材电视剧《历史转折中的邓小平》中饰演邓小平。2015年，主演丁黑执导的历史题材电视剧《冯子材》。2016年，参演李雪执导的医疗题材都市剧《外科风云》。2017年，主演主旋律文艺电影《匠心》 。